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本制品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理，采用上层胶和下层胶的预混配方，灌入下层胶后，无需等待凝胶，直接灌入上层胶即可，可在15分钟内配制得到高质量的聚丙烯酰胺凝胶，可用于变性和非变性蛋白凝胶电泳，适用于Tris-甘氨酸电泳体系（Laemmli体系）。本制品可以配制6%（黄色上层胶）、7.5%（绿色上层胶）、10%（蓝色上层胶）、12.5%（红色上层胶）和15%（紫色上层胶）的分离胶浓度，所配的上层胶带有颜色(黄色、绿色、蓝色、红色或紫色)，点样孔清晰易辨，方便点样，可以满足绝大多数蛋白电泳需求。

• 快速制备凝胶：无需液封等待下层胶凝固，即可直接灌注上层胶，制胶更省时；
  
• 彩色上层胶：可制备五种颜色的上层胶，为点样和区分不同凝胶提供便利；
  
• 避免异味：无需使用TEMED，环境安全友好；
  
• 凝胶高稳定性：中性pH凝胶，有效提高凝胶稳定性，密封条件下，凝胶可以四度贮存6个月。
  
• 兼容性广：制胶溶液中不含SDS，可用于非变性电泳（Native-PAGE）。

本试剂盒大约可以配制60-125块常规大小（8×10cm）的PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75mm厚度凝胶可以配制125块胶，1.0mm厚度凝胶可以配制至少90块胶，1.5mm厚度凝胶可以配制至少60块胶。

• 本制品配套提供改良型促凝剂，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。
  
• 为方便操作，已开盖使用中的改良型促凝剂，可置于4℃保存至少三个月，-20℃保存一年。

• 即用型改良型促凝剂配制：试剂盒提供的改良型促凝剂为干粉，第一次使用前加入10mL超纯水，彻底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝剂置于4℃备用，有效期3个月，长期不用建议-20℃贮存。
  
• 推荐操作：实验前半小时，取出试剂盒所有组份，常温静置半小时使溶液恢复到常温后轻柔混匀，可以有效降低制胶时产生气泡的可能性。

• 取等体积彩色上层胶缓冲液和上层胶溶液，各0.5/0.75/1.0mL，混匀。
  
  由于染料的特殊理化性质，彩色上层胶缓冲液使用前请摇匀。
  
  
• 取等体积下层胶缓冲液和下层胶溶液，各2.0/2.5/4.0mL，混匀。
  
• 向步骤1的上层胶混合溶液中加入10/15/20μL改良型促凝剂，轻轻混匀。
  
  加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
  
  
• 向步骤2的下层胶混合溶液中加入40/50/80μL改良型促凝剂，轻轻混匀；将溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离为约1.5cm或距离梳齿下沿距离为约0.5cm即可。
  
  此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于制胶杯中，便于判断凝胶状态；加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合和导致凝胶内可能产生气泡。
  
  
• 无需等待下层胶凝固，迅速将步骤3的上层胶混合溶液左右平移缓慢轻柔注入制胶玻璃板中插入梳齿。
  
  加入下层胶混合溶液后，请在1～2分钟内灌注上层胶混合溶液，加入时一定要轻缓，避免将上层胶溶液冲入下层胶；凝固后上下层胶分界线平整度略弱于使用一步法（封闭法）配制的凝胶，但对后续电泳没有影响。
  
  
• 待胶凝固后拔去梳齿，用枪头吸取电泳缓冲液将加样孔冲洗干净，即可进行常规电泳操作。
  
  凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。

• 变性电泳：
  

  电泳缓冲液	Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液
  上样缓冲液	5×蛋白上样缓冲液（变性，还原）
  电泳条件	恒压，200V，40～55min

  
  
• 非变性电泳：
  

  电泳缓冲液	Tris-甘氨酸电泳缓冲液
  上样缓冲液	5×蛋白上样缓冲液（非变性，非还原）
  电泳条件	恒压，150 V，50～65min

  
  
  • 非变性电泳必看：该凝胶体系pH大约8左右，适用于等电点pI小于8的蛋白电泳分离，pI越远离8，带的负电荷越多，分离就更容易；等电点接近8或者高于8的蛋白不适合用该系统进行非变性电泳。

• 凝胶染色可以选择QuickLan蛋白染色液，可以在30分钟内完成染色和脱色，也可以选择常规法考马斯亮蓝染色液。
  
• 转膜缓冲液可以使用湿转法或半干转方法转膜。湿转法可以使用经典10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转)或者使用10×TrueBlot快速转膜液。半干转转膜可以使用5×快速半干转转膜缓冲液。